最近搜索:細胞培養 微生物學 分子生物 生物化學
首頁>>新聞中心>>技術中心
Western Blot 實驗原理及相關試劑詳解

Western Blot 實驗原理:蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot,也稱Western、Western blotting、Western印跡,是用抗體檢測蛋白的重要方法之一。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。

與 Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝 酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗 體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應,經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋 白水平的表達。

Western Blot 實驗步驟:樣品制備、上樣與電泳、轉膜、封閉、抗體孵育和檢測

WB-1.png


Western Blot 實驗試劑:

   樣品制備   

WB-2.jpg


   蛋白定量   

應用: WB;Dot;ELISA 推薦稀釋濃度: 1:500-1:5000
同種型:小鼠lgG 特異性:適用所有物種
Bradford 法是最簡單和快速的比色蛋白定量方法,Bradford 方法進行了改良,最大限度的加大蛋白定量的線性范圍,變異性小于普通考馬斯亮藍染色法,靈敏度范圍為 100~1500 μg/mL。
BCA蛋白定量試劑盒,45分鐘內可完成測定,蛋白質測定范圍是20~2000 μg/mL。

WB-3.jpg

注:用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度;由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由RIPA裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。


   孵育盒    

WB-4.jpg


   凝膠溶液   

WB-5.jpg

   電泳及上樣緩沖液    

WB-6.jpg


   蛋白Marker   

WB-7.jpg


   染色液    

WB-8.jpg


   轉膜緩沖液   

WB-9.jpg


   轉印膜   

WB-10.jpg


   酶標二抗    

二抗建議稀釋范圍:
免疫組化/免疫化學:1:500 - 1:5,000
ELISA 和 WB(顯色底物):1:5,000 - 1:100,000
WB(ECL化學發光底物):1:10,000 - 1:200,000
防腐劑:無添加 (疊氮化鈉作為防腐劑的使用將大大抑制辣根過氧化物酶的酶活性)。

WB-10.5.jpg


   封閉    

WB-11.jpg

   內參及標簽抗體    

應用: WB;Dot;ELISA 推薦稀釋濃度: 1:500-1:5000
同種型:小鼠lgG 特異性:適用所有物種

WB-12.jpg


   顯色試劑    

拜爾迪超敏化學發光液是一種基于魯米諾的超靈敏、極低背景的化學發光檢測底物溶液。通過加入促進化學發光信號的復合增強劑,對蛋白印跡實驗中辣根過氧化物酶的檢測具有極高靈敏度,可以檢測到≤0.05ng/ml 濃度的 HRP。

WB-13.jpg

詳情咨詢

北京拜爾迪生物技術有限公司

咨詢熱線:010-62960866

地址:北京市海淀區信息路30號上地大廈4021室


35选7兑奖